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影響WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)的結(jié)果的因素有哪些?

更新時(shí)間:2022-04-22      瀏覽次數(shù):794
  WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)的結(jié)果的因素主要有以下幾方面:
 
  1、預(yù)染marker的誤差:
 
  由于預(yù)染marker是由標(biāo)準(zhǔn)蛋白與有色染料偶聯(lián)而成的,所以偶聯(lián)后的蛋白由于表面結(jié)構(gòu)的改變,導(dǎo)致在SDS-PAGE中分離的線性關(guān)系沒有天然蛋白那么好;另外由于偶聯(lián)的批次不同,每個(gè)條帶針對(duì)每個(gè)批次呈現(xiàn)出的分子量會(huì)有些許的變化,所以在使用預(yù)染marker的時(shí)候,出現(xiàn)5-10%的分子量誤差是不能避免的,如果需要確切分子量需要用非預(yù)染marker來標(biāo)定。
 
  2、物種差異:
 
  很多蛋白在人源、大鼠源、小鼠源中存在的長(zhǎng)度并非*一致,具體問題還要具體分析;
 
  3、蛋白本身的性質(zhì):
 
 ?、俜肿恿繑?shù)值僅僅是一個(gè)氨基酸數(shù)值累加的相對(duì)值,與實(shí)際值本身存在差距;
 
 ?、诘鞍踪|(zhì)存在磷酸化、乙?;?、糖基化等翻譯后修飾可導(dǎo)致分子量增大,比如常見的CD家族蛋白糖基化修飾以后分子量都會(huì)增大許多;
 
 ?、鄣鞍踪|(zhì)存在翻譯后酶前體狀態(tài)與激活剪切狀態(tài),可使分子量變小,比如MMP2蛋白,酶源與激活態(tài)大小分別是72kDa、63kDa;
 
 ?、艿鞍踪|(zhì)存在多個(gè)轉(zhuǎn)錄本由一個(gè)基因編碼的形式,不同的轉(zhuǎn)錄本翻譯得到的蛋白分子量不一樣,比如JNK這個(gè)蛋白,本身分為JNK1,JNK2,JNK3三個(gè)亞型,三種亞型同源性較高,而且針對(duì)每個(gè)亞型還有不同分子量的轉(zhuǎn)錄本呈現(xiàn);要想正確把握蛋白分量問題不僅僅要讀說明書,還要關(guān)注這個(gè)蛋白的相關(guān)背景知識(shí)。
 
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